Nephelometry: hva det består av og applikasjoner

Nephelometri er måling av stråling forårsaket av partikler (i oppløsning eller i suspensjon), og måler således strømmen til den spredte strålingen i en annen vinkel enn retningen for den hevde strålingen.

Når en partikkel i suspensjon er nådd av en stråle av lys, er det en del av lyset som reflekteres, en annen del blir absorbert, en annen del avledes og resten overføres. Dette er grunnen til at når lyset treffer et gjennomsiktig medium der det er en suspensjon av faste partikler, blir suspensjonen observert overskyet.

Hva er nephelometri?

Dispersjon av stråling av partikler i oppløsning

I det øyeblikk hvor en stråle av lys rammer partiklene av et stoff i suspensjon, forandrer strålingsretningen sin retning. Denne effekten avhenger av følgende aspekter:

1.Dimensjoner av partikkelen (størrelse og form).

2. Suspensjonsegenskaper (konsentrasjon).

3. Bølgelengde og intensitet av lys.

4. Avstand av hendelseslys.

5. Deteksjonsvinkel.

6. Brekningsindeks for mediet.

nefelo

Nephelometeret er et instrument som brukes til å måle partikler suspendert i en flytende prøve eller i en gass. Så en fotocelle plassert ved 90 ° vinkel i forhold til en lyskilde detekterer strålingen av partiklene som er tilstede i suspensjonen.

Lyset reflekteres også av partiklene mot fotocellen avhengig av partiklens tetthet. Diagram 1 presenterer de grunnleggende komponentene som utgjør en nebelometer:

A. Strålingskilde

I nephelometri er det viktig å ha en strålekilde med høy lyseffekt. Det finnes forskjellige typer, som spenner fra xenonlamper og kvikksølvdamper, wolfram halogenlamper, laserstråling, blant andre.

B. Monokromatorsystem

Dette systemet ligger mellom stråle- og kuvettkilden, slik at forekomsten på strålekvuetten med forskjellige bølgelengder i forhold til ønsket stråling unngås.

I motsatt fall vil fluorescensreaksjoner eller oppvarmingseffekter i løsningen føre til avvik fra måling.

C. Lesebok

Det er en generelt prismatisk eller sylindrisk beholder, og kan ha forskjellige størrelser. Dette er løsningen under studien.

D. Detektor

Detektoren befinner seg i en bestemt avstand (vanligvis svært nær tanken) og er ansvarlig for å detektere strålingen dispergert av partiklene av suspensjonen.

E. Lesesystem

Vanligvis er det en elektronisk maskin som mottar, konverterer og behandler data, som i dette tilfellet er målingene hentet fra studien utført.

avvik

Hver måling er underlagt en prosentandel feil, som hovedsakelig er gitt av:

Forurenset kuvetter : I kuvetter reduserer ethvert middel utenfor løsningen som er studert, som er innenfor eller utenfor kyvetten, strålingslyset på banen til detektoren (defekte kuvetter, støv som er klæbet til kuvettens vegger).

Interferens : Tilstedeværelsen av noe mikrobiell kontaminant eller turbiditet sprer strålende energi, noe som øker intensiteten av dispersjonen.

Fluorescerende forbindelser : Disse er forbindelser som, når de er opphisset av innfallende stråling, forårsaker feilaktige og høye avlesninger av dispersjonstettheten.

Reagensbeskyttelse : Systemets utilstrekkelige temperatur kan forårsake uønskede forhold til studien og ville opphisse tilstedeværelsen av uklare reagenser eller utfelter.

Fluktuasjoner i elektrisk kraft : For å unngå at strålingen er en feilkilde, anbefales spenningsstabilisatorer for jevn stråling.

Metrologiske egenskaper

Siden strålingsstyrken til den detekterte strålingen er direkte proporsjonal med partikkelkonsentrasjonen, har nephelometriske studier i teorien en høyere metrologisk følsomhet enn andre lignende metoder (som turbidimetri).

I tillegg krever denne teknikken fortynnede løsninger. Dette tillater at både absorpsjons- og reflekteringsfaktorer minimeres.

søknader

Nephelometriske studier har en svært viktig posisjon i kliniske laboratorier. Anvendelsene spenner fra bestemmelsen av immunglobuliner og proteiner av akutt fase, komplement og koagulasjon.

Påvisning av immunkomplekser

Når en biologisk prøve inneholder et antigen av interesse, blandes det (i en bufferløsning) med et antistoff for å danne et immunkompleks.

Nephelometri måler mengden lys som er spredt av antigen-antistoffreaksjonen (Ag-Ac), og på denne måten oppdages immunkomplekser.

Denne studien kan utføres ved to metoder:

Nephelometri av sluttpunktet:

Denne teknikken kan brukes til analyse av sluttpunktet, hvor antistoffet i den studerte biologiske prøve inkuberes i 24 timer.

Ag-Ac-komplekset måles ved hjelp av en nephelometer og mengden av spredt lys sammenlignes med samme måling som utføres før dannelsen av komplekset.

Kinetisk nephelometri

I denne metoden overvåkes frekvensen av kompleks formasjon kontinuerlig. Reaksjonshastigheten avhenger av konsentrasjonen av antigenet i prøven. Her blir målingene tatt som en funksjon av tiden, så det første tiltaket blir tatt på tidspunktet "null" (t = 0).

Kinetisk nephelometri er den mest brukte teknikken, siden studien kan utføres om 1 time, i forhold til den lange perioden av endpointmetoden. Dispersjonsforholdet måles like etter at reagensen er tilsatt.

Derfor, så lenge reagensen er konstant, anses mengden antigen som er presentert direkte proporsjonal med forandringshastigheten.