EMB agar: grunnlag, forberedelse og bruk

EMB agar er et selektivt og differensielt fast kulturmedium som brukes til isolering av gramnegative baciller, hovedsakelig fra familien Enterobacteriaceae, og andre ikke-krevende gramnegative baciller. Det er også kjent med akronymet EAM, som betyr eosin-metylenblå.

Dette mediet ble skapt av Holt-Harris og Teague i 1916. Det inneholder pepton, laktose, sukrose, dikaliumfosfat, agar, eosin, metylenblå og vann. Det er veldig lik MacConkey agar, spesielt hvis EMB agar endret av Levine brukes, som ikke inneholder sukrose.

Faktisk bestemmer hvert laboratorium om det virker med den ene eller den andre, siden de oppfyller samme funksjon, selv om de er biokjemiske, de er forskjellige.

Den gir også den samme ulempen som den klassiske MacConkey agaren i form av swarming produksjon av slekten Proteus. For å unngå dette fenomenet kan agarkonsentrasjonen økes med opptil 5%.

fundament

selektiv

EMB-agar er subtilt selektiv fordi den inneholder aniliniske fargestoffer (eosin og metylenblå), som virker som inhibitorer, forhindrer veksten av de fleste Gram-positive bakterier og noen krevende Gram-negative baciller.

Imidlertid har denne agar den ulempen at noen Gram-positive bakterier kan motstå tilstedeværelsen av de hemmende substansene og vokse som små, fargeløse, punktlignende kolonier, slik som Enterococcus faecalis og noen Staphylococcus .

Du kan også vokse visse gjær, slik som Candida albicans-komplekset, som vil gi svært små rosa kolonier. Inkludert kan klamydosporer utvikles fra denne gjær hvis prøven blir sådd på dybden.

differensial

På den annen side er EMB agar også et differensielt medium, siden disse fargestoffer sammen (eosin og metylenblå) har egenskapen til å danne et bunnfall ved sur pH, derfor tjener de som indikatorer for sin produksjon.

Derfor produserer svakt gjærende laktose- eller sukrosebakterier lilla kolonier i 24 til 48 timer. For eksempel släktet Klebsiella, Enterobacter og Serratia.

De bakteriene som sterkt fermenterer laktose, som Escherichia coli eller sukrose, som Yersinia enterocolitica eller Proteus penneri, danner et grønt svart felling, noe som gir en karakteristisk metallisk glans i disse artene.

Det skal bemerkes at hvis EMB levin medium (uten sukrose) brukes, vil Yersinia enterocolitica og Proteus penneri produsere klare kolonier.

Bakterier som ikke gjærer laktose eller sukrose, er næret av tilstedeværelsen av peptoner, som gir aminosyrene og nitrogenet som er nødvendige for bakteriell utvikling, og produserer klare kolonier. For eksempel, slægten Salmonella og Shigella, blant andre.

På samme måte er det viktig å merke seg at slekten Acinetobacter kan presentere lavendelblå kolonier, selv om det ikke er en fermentor av laktose eller sukrose, men de har egenskapen til å fikse metylenblå i sin cellevegg. Dette kan også skje med andre oksidative bakterier.

forberedelse

Det opprinnelige dehydrerte mediet er lys beige.

For å forberede dette kultursmediet, bør 36 gram av dehydratiserte medium veies og suspenderes i et hetteglass som inneholder en liter destillert vann.

Etter å ha forlatt blandingen i 5 minutter i hvile, ta fiolaen til en varmekilde, bland den kraftig og konstant til den kokker og den er helt oppløst.

Deretter må det allerede oppløste kulturmediet steriliseres ved bruk av autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

På slutten av tiden fjernes den fra autoklaven og lar seg hvile kort. Deretter serveres det til og med varmt (45 - 50 ° C) mellom 15 til 20 ml agar i hver steril petriskål. Mediet skal være blå litmus.

Etter servering blir platene litt avdekket til agaret kjøler litt. Da de er dekket og tillatt å størkne helt. Senere bestilles de i en invertert plakettholder og oppbevares i kjøleskap (8 ° C) til bruk.

Denne prosedyren utføres fortrinnsvis i en laminarflytende hette eller foran Bunsen-brenneren for å unngå forurensning.

Det er viktig å huske på at hvert kommersielt hus vil indikere mengden som skal veies for å forberede kulturmediet.

Den endelige pH i mediet bør være 7, 2 ± 0, 2

søknader

Dette mediet brukes til å så urin og avføring eller noen form for kliniske prøver, spesielt hvis det er mistanke om tilstedeværelse av ikke-krevende gramnegative baciller, som baciller som tilhører familien Enterobacteriaceae, som vokser veldig bra i dette mediet.

De enteropathogene bakteriene av slægten Shigella og Salmonella utmerker seg av deres fargeløse eller litt gule kolonier.

Andre ikke-fermenterende laktosebaciller vokser også, blant annet Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter.

På samme måte er dette mediet svært nyttig i den mikrobiologiske analysen av mat og vann, da den er ideell for den fullstendige bekreftelsesfase for bestemmelse av coliformer, det vil si å bekrefte tilstedeværelsen av E. coli fra uklare EG-buljonger fra av den mest sannsynlige tallteknikken (NMP).

Kvalitetskontroll

For å verifisere at det nylig preparerte kulturmediet fungerer bra, kan kontrollstammer plantes for å observere koloniernes egenskaper og verifisere at de er i overensstemmelse med forventningene.

For dette kan ATCC-stammer eller velkjente stammer av E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa og noen Gram-positive bakterier, så som S. aureus, anvendes .

Det forventes at E. coli vil generere velutviklede blå-svarte kolonier med grønn metallisk glans. Mens Enterobacter aerogenes og Klebsiella sp må gi velutviklede, blåaktig-svarte slimete kolonier.

På den annen side, Salmonella typhimurium og Shigella flexneri, må utvikle store kolonier, fargeløse eller med en liten gul farge.

Endelig vokser slekten Pseudomonas aeruginosa som fargeløse kolonier av uregelmessig størrelse, mens Gram-positive bakterier skal være helt inhiberte eller vokse sparsomt med svært små kolonier.

Endelige hensyn

Noen ganger forårsaker steriliseringen metylenblåen å redusere, observere et oransje medium. For at metylenblåen skal oksyderes og den lilla fargen skal gjenopprettes, må den blandes forsiktig til fargene gjenoppretter.

Etter steriliseringen kan også fargestoffet utfelle, så det må blandes godt før du serverer petriskålene.