Kinyoun-farging: grunnlag og teknikker

Kinyoun-farging er en fargingsteknikk som brukes til å plette bakterier og syrefaste parasitter. Det ble født av modifiseringen av fargen av Ziehl-Neelsen; Begge teknikkene tolkes på samme måte, men de varierer i to elementer: Ved utarbeidelse av hovedreagenset, og at Kinyoun-teknikken ikke bruker varme.

Av denne grunn er det også kjent som kaldmodifisert Ziehl-Neelsen eller Kinyoun kaldt flekker. Det er indikert for fargestoffer av Mycobacterium tuberculosis, Micobacterium leprae, atypiske mykobakterier, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris og Cyclosporas cayetanensis .

Det er verdt å merke seg at nocardiene er svake med denne teknikken siden de er delvis syrefast bestanddel, så for denne sjangeren er det en modifisering av metoden.

Kinyoun-kaldteknikken har i sin tur blitt kombinert med trichrometeknikken modifisert av Didier for påvisning av coccidia ( Criptosporidium parvum og Isospora belli ) og sporer av mikrosproridia ( Enterocytozoon bieneusi og Encephalitozoon intestinalis ).

fundament

Hovedfargingsreagenset er carbol fuchsin eller fenicaine fuchsin, som har egenskapen til binding til karbonsyrene i voksaktig cellevegg, rik på lipider (mykolsyre) av mykobakterier og visse parasitter.

Den fagforeningen er ikke motvirket av syreavfarging; Derfor er mikroorganismer definert som syrebestandig alkohol.

I motsetning til Ziehl-Neelsen-teknikken - som fikserer fargestoffet gjennom varme - i Kinyoun-teknikken er dette trinnet ikke nødvendig, siden fenol fuchsin-løsningen forberedt for denne teknikken inneholder en høy konsentrasjon av fenol.

Fenol løser lipidmaterialet i celleveggen, som tillater innføring av carbol fuchsin fargestoff. Etter at fargen penetrerer, forblir den fast til tross for vasking med alkohol-syre.

På denne måten tar de syrefaste mikroorganismer den karakteristiske røde fargen, mens alt som ikke er syrefast aluminium blir misfarget og farget blå.

teknikk

materialer

- Modifisert fenol fuchsin.

- Alkohol-syre.

- Methylenblå.

Fremstilling av Kinyoun-fenikert fuchsin

- Grunnleggende fuchsin: 4 gr.

- fenol: 8 ml

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destillert vann: 100 ml.

Den grunnleggende fuchsinen i alkohol må oppløses sakte, blandes konstant. Deretter smelter den krystalliserte fenol i et vannbad ved 56 ° C. Når det er oppløst, tilsettes 8 ml til fuchsinoppløsningen fremstilt ovenfor.

Fremstilling av alkohol-syre

- Konsentrert saltsyre: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Det må måles, sammenføyes og blandes.

Fremstilling av metylenblått kontrastfarve

- Methylenblå: 0, 3 g.

- Destillert vann: 100 ml.

Den veier og oppløses.

Kinyoun-flekkteknikk

1- Forbered et smør direkte fra prøven, som kan være sputum, lungevæske, urinsediment, cerebrospinalvæske eller avføring, blant andre; eller fra en suspensjon av mikroorganismer oppnådd fra rene kolonier dyrket i primærkulturmedier.

2- Fest smøret med varme.

3- Plasser smøret på fargebroen og dekk med Kinyouns fenoliske fuchsinreagens tilberedt. La det hvile i 3 eller 5 minutter.

4- Vask med destillert vann.

5- Blek med syrealkohol i 3 minutter og vask igjen med destillert vann.

6 - Blek igjen med syrealkohol i 1 eller 2 minutter til ingen mer fargestoff er trukket.

7- Vask med destillert vann og la avløp, plasser lysbildet i vertikal stilling.

8- Dekk preparatet med metylenblått og la det stå i 4 minutter.

9 - Vask med destillert vann og la luften tørke.

10- Undersøk ved 40X og deretter ved 100X.

Hvis du vil forbedre og akselerere fargingen av syrefaste mikroorganismer, tilsetter du 1 dråpe et fuktemiddel (som tergitol nr. 7) til 30 eller 40 ml Kinyoun feninsyrefuchsin.

Noen laboratorier forandrer metylenblått kontrastfarve for lysegrønne eller pikrinsyre; den første gir en grønn farge til bakgrunnen og den andre genererer en gul farge.

Kinyoun teknikk spesielt for Nocardias

For å forbedre fargingen av Nocardia-bakterier, brukes en modifikasjon av Kinyoun-farging. Teknikken er som følger:

1- Dekk smeten med Kinyoun fenol fuchsin i 3 minutter.

2- Vask med destillert vann.

3- Blush kort med 3% sur alkohol til ingen mer fargestoff er innblandet.

4- Vask igjen med destillert vann.

5- Dekk preparatet med metylenblått og la det stå i 30 sekunder.

6- Vask med destillert vann og la luften tørke.

Kombinert teknikk av fenol og trichromic fuchsin modifisert av Didier

Denne teknikken anbefales for analyse av avføring prøver på jakt etter coccidia og sporer av Microsporidium sp samtidig. Prosedyren som skal følges er som følger:

1- Dekke smeten med Kinyoun fenol fuchsin i 10 minutter.

2- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.

3- Blek i 30 sekunder med alkohol saltsyre.

4- Vask igjen med destillert vann.

5- Dekk smøret med trichrom-oppløsning i 30 minutter ved 37 ° C.

6- Vask med destillert vann.

7- Dekoloriser i 10 sekunder med alkohol eddiksyre.

8- Vask smøret i 30 sekunder ved bruk av 95% etanol.

Kvalitetskontroll

Som en positiv kontroll, utarbeides smør med stammer av Mycobacterium tuberculosis og farget med de preparerte reagensene for å verifisere at bakteriene tar den riktige farge (rødfuksi).

Negative kontroller kan også brukes ved å forberede smører med en hvilken som helst belastning som ikke er sur alkoholbestandig, og dermed verifisere at hele prøven tar fargen på kontrast.

Kinyoun-teknikk sammenlignet med Ziehl-teknikken -Neelsen

Kinyoun-teknikken er enklere fordi den eliminerer oppvarmingstrinnet, men den største fordelen er at den forhindrer utslipp av damp, svært giftig og forårsaker kreft på lang sikt. Derfor er Kinyoun-farging sikrere for personell med ansvar for farging.

Det er viktig å ta hensyn til at det er nødvendig å ta vare på at reagensene ikke kommer i direkte kontakt med huden, da de er etsende og bleken er brannfarlig.

Med hensyn til ulempene indikerer et negativt smør ikke nødvendigvis at mikroorganismen ikke er tilstede. I tillegg kan tilstedeværelsen av celledetritus forårsake falske positiver, noe som genererer forvirring i diagnosen.

referanse

1. Anvendt klinisk kjemi (2016). BK Kinyoun Kit. Tilgjengelig på: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun flekker og to kakcidier i HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiologisk diagnose av Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utgave). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Wikipedia bidragsytere. «Kinyoun flekken». Wikipedia, den frie encyklopedi . Wikipedia, Free Encyclopedia, 8. februar 2018. Web. 5. januar 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementering av en fargeteknikk for samtidig diagnostisering av Coccidia og Microsporidia. Hygiene Institute of Republic of Republic. Montevideo. Uruguay. Tilgjengelig på: higiene.edu.uy